Kaj je Zimografija?

Zimografija je tehnika, ki jo izvajajo biokemiki, pri kateri se delci razpršijo z električnim nabojem v procesu, znanem kot elektroforeza. Natančneje, postopek uporablja substrat, v katerem bo encim reagiral s polimerizacijo s polikrilamidnim gelom, raztopino na vodni osnovi, narejeno iz strupenih materialov. Ta zimogramski gel je znan kot poliakrilamidni gel natrijevega dodecil sulfata (SDS-PAGE).

Biokemik, ki izvaja zimografijo, bo z metodo elektroforeze pripravil gel za zimogram. Običajno se ta metoda izvaja v povezavi z vrenjem ali redukcijo gela. Vendar pa pri zimografiji gel SDS-PAGE ostane nedotaknjen. Po tem koraku se del spojine SDS odstrani z uporabo materiala, znanega kot Triton X-100™, oksidacijskega detergenta podjetja BASF™. Ta material se dolgo časa hrani pri 98°F (približno 37°C) v naprednem inkubatorju. Biokemik bo nato obarval preostali material s črno ali modro spojino. To raziskovalcu omogoča, da ugotovi, kje in kako poteka prebava z encimi v snovi.

Medtem ko je gel SDS-PAGE najpogosteje uporabljena snov v zimografiji, je mogoče uporabiti druge vrste materiala za identifikacijo hitrosti prebave in sposobnosti encima. Velikokrat to vključuje dodatek škrobnega filma, ki pomaga pri vizualni identifikaciji.

Biokemiki in biomedicinski inženirji običajno uporabljajo ta proces, da bi spoznali nove oblike encimov. Z opredelitvijo hitrosti prebave in vzorcev gibanja encima je mogoče identificirati različne lastnosti človeških in živalskih beljakovin. To se uporablja za nekatere genetske raziskave in analize ter aplikacije za zdravila in zdravila.

S postopkom zimografije je treba ravnati previdno. Čeprav je to načeloma mogoče storiti z minimalnimi varnostnimi ukrepi, se mora vsak znanstvenik ali raziskovalec, ki ravna z materiali, izogibati fizičnemu stiku. Tako detergent Triton X-100™ kot gel SDS-PAGE sta lahko zelo strupena za kožo.

Obstajajo številni encimi, ki se na ta proces ne odzivajo po pričakovanjih. Na primer, prebavne glikozidaze D. melanogaster lahko preživijo redukcijske procese pri drugih vrstah prebavnih preiskav. Poleg tega bo preživel proces segrevanja vse do 122°F (približno 50°C), kar precej presega raven, ki je potrebna v tradicionalnem zimografskem postopku. Ko encim preživi proces, ne da bi popolnoma prebavil gel SDS-PAGE, se na končnih stopnjah opazi povečana ločljivost pasu. To lahko povzroči težave pri pridobivanju pravilnih rezultatov postopka zimografije.