Encimsko vezan imunski test (ELISA) je običajen test, ki se uporablja v imunologiji za odkrivanje antigenov ali protiteles. Antigeni izzovejo reakcijo imunskega sistema – z drugimi besedami, povzročajo bolezni. ELISA se uporablja za odkrivanje številnih bakterijskih in virusnih antigenov, vključno z virusom humane imunske pomanjkljivosti (HIV), malarijo, kolero, ošpicami in mumpsom. Za odkrivanje protiteles proti tem in številnim drugim patogenom je mogoče uporabiti nekoliko drugačen protokol ELISA. Protokol ELISA je postopek po korakih za izvajanje specifične ELISA.
Čeprav se protokol ELISA nekoliko razlikuje, odvisno od vrste ELISA, ki se izvaja, je osnovni koncept enak za vse. ELISA je odvisna od encimsko povezanih protiteles, imenovanih tudi antiglobulini. Signalna molekula, vezana na te antiglobuline, povzroči, da substrat, dodan med testom, spremeni barvo, če je prisoten želeni antigen ali protitelo. Količina prisotnega antigena ali protitelesa je sorazmerna s količino spremembe barve, ki jo lahko izmerimo z elektronskim čitalnikom plošč.
Obstajajo tri glavne vrste ELISA. Neposredna ELISA se običajno uporablja za odkrivanje antigenov in ne protiteles. To je najpreprostejši protokol ELISA, saj se encimsko vezano protitelo veže neposredno na želeni antigen. Nato dodamo substrat, da določimo količino prisotnega antigena.
Za odkrivanje protiteles se uporablja posredna ELISA, medtem ko se za odkrivanje antigenov lahko uporablja druga vrsta posredne ELISA, imenovana sendvič ELISA. Protokol sendvič ELISA zahteva dve protitelesi, imenovani protitelesa za zajem in odkrivanje, da se vežeta na želeni antigen. Doda se antiglobulin, ki se veže na detekcijsko protitelo, in substrat. Posredni ELISA sledi podobnemu protokolu, vendar za odkrivanje želenega protitelesa uporablja antigen za zajem in ne protitelo za zajemanje.
Konkurenčni ELISA se pogosto uporablja za odkrivanje antigenov, ki so prisotni v nizkih koncentracijah, ker je zelo občutljiv test. V nasprotju z drugimi protokoli ELISA, konkurenčna ELISA uporablja encimsko vezan antigen namesto protitelesa in nekoliko drugačno metodo kvantifikacije. V njem se vzorec, ki vsebuje antigen, ki ga je treba odkriti, in encimsko vezan antigen dodata protitelesu in oba antigena tekmujeta za mesta vezave protiteles. Ko dodamo substrat, je sprememba barve večja, z višjim razmerjem vezanih encimsko povezanih antigenov in vezanih vzorčnih antigenov. To pomeni, da se pri nižjih koncentracijah vzorčnega antigena zazna večja sprememba barve, zaradi česar je ta metoda tako občutljiva.