Kaj je protitelo FITC?

Protitelo, konjugirano s fluorescein izotiocianatom (FITC), je fluorescentni molekularni marker, ki je zelo specifičen bodisi za določen protein bodisi za primarno protitelo. Uporabljajo se za identifikacijo beljakovin v imunocitokemiji, testih encimske in beljakovinske aktivnosti, pretočni citometriji in Western blottingu. Večino protiteles FITC je mogoče kupiti pri specializiranih podjetjih za molekularno biologijo ali izdelati v posameznih raziskovalnih laboratorijih.

FITC je fluorokrom, ki je pogosto konjugiran ali povezan s protitelesom, da se naredi specifičen, fluorescentni marker. Ko so izpostavljeni elektromagnetni energiji pri določeni valovni dolžini, so fluorokromi kemikalije, ki absorbirajo energijo in oddajajo foton na določeni valovni dolžini. FITC absorbira energijo pri 495 nm in oddaja foton pri 521 nm. Vsak fluorokrom ima drugačen obseg absorpcije in emisije, kar omogoča sistematično odkrivanje številnih protiteles, povezanih s fluorkromom, v enem kosu tkiva ali vzorcu. To je podobno označevanju različnih delov celice z različnimi barvami in nato uporabi specializiranih očal za ogled samo ene barve naenkrat.

Protitelesa se lahko povežejo ali konjugirajo z molekulo FITC, da proizvedejo protitelo FITC. To protitelo FITC se lahko uporablja za neposredno ali posredno označevanje beljakovin. Ko protitelo FITC neposredno označi protein, deluje kot primarno protitelo ali protitelo v neposrednem stiku z antigenom. Do posredne uporabe protitelesa FITC pride, ko se uporablja kot sekundarno protitelo, ki se specifično veže na primarno protitelo. Ko se FITC konjugirano protitelo uporablja neposredno, postopek označevanja traja manj časa, vendar označevanje ni tako močno. Posredno označevanje zahteva dodaten korak, vendar se signal ali oznaka ojača, ker se lahko več sekundarnih protiteles, označenih s FITC, pritrdi na eno primarno protitelo.

V celični in molekularni biologiji obstaja veliko uporab protitelesa FITC. To vrsto protiteles je mogoče uporabiti samostojno ali v kombinaciji z drugimi monoklonskimi ali poliklonskimi protitelesi za označevanje specifičnih proteinov v celicah s tehniko, znano kot imunocitokemija. Protitelesa FITC se lahko uporabljajo tudi v takih tehnikah, kot so testi aktivnosti encimov in beljakovin, pretočna citometrija in Western blotting.

Primarna in sekundarna protitelesa, konjugirana s FITC, so široko dostopna pri številnih podjetjih za molekularno biologijo. Laboratoriji lahko pripravijo tudi svoja primarna protitelesa in nato uporabijo komplet za konjugacijo FITC z njimi. Nekatera podjetja bodo vzela laboratorijsko pripravljena primarna protitelesa in jih konjugirala s fluorokromom FITC za laboratorij. Sekundarna protitelesa, konjugirana s FITC, običajno ne izdelujejo posamezni raziskovalni laboratoriji in jih običajno kupujejo pri podjetjih, specializiranih za proizvodnjo sekundarnih protiteles.