Kaj je popolna izolacija RNA?

Izolacija celotne ribonukleinske kisline (RNA) je laboratorijska tehnika, ki se uporablja za ekstrakcijo celotne celične RNA iz vzorca tkiva. To se razlikuje od drugih metod obdelave, ki selektivno izvlečejo določene vrste RNA. Raziskovalec bi lahko na primer želel pregledati sporočilno RNA (mRNA) in bi lahko delal z vzorcem za ekstrakcijo samo tega genskega materiala. Za popolno izolacijo RNA so na voljo številni laboratorijski protokoli z uporabo različnih izdelkov znanstvenih dobaviteljev.

Zbiranje celotne celične RNA iz vzorca tkiva ima lahko številne prednosti. Lahko prinese bolj čiste in uporabne informacije. Tehnika lahko tudi omogoči raziskovalcem, da preverijo degradacijo, ki bi lahko povzročila težave pri poskusih. Če je vzorec slabe kakovosti, lahko raziskovalec ponovno ekstrahira RNA, da dobi čistejšo in uporabnejšo zbirko RNA. To je lahko pomembno za številne vrste raziskav, kjer slaba RNA na začetku povzroča težave pri poskusih v nadaljevanju.

Tehnike za popolno izolacijo RNA lahko vključujejo različna kemična sredstva. Nekateri se osredotočajo na uporabo netoksičnih kemikalij za zmanjšanje tveganja poškodb vzorca. Takšne kemikalije omejujejo tudi onesnaževanje RNA v spodnjem toku in so varnejše za laboratorijske delavce. Laboratoriji ponavadi izberejo določeno kemikalijo in protokol, ki ga priporočajo vsem osebjem, in v svoje priročnike vključijo podroben opis celotnega postopka izolacije RNA. To zagotavlja doslednost pri obdelavi RNA v objektu, da se dobijo bolj stabilni in uporabni rezultati.

Postopek se začne s pripravo vzorca tkiva, ki se lahko razlikuje po velikosti, da se pripravi za obdelavo s kemičnimi reagenti za izvlečenje celotne RNA. Tehniki se posvetujejo z laboratorijskim priročnikom, da ugotovijo, kako ravnati z vzorcem in ga obdelati za izolacijo RNA. Za preverjanje kakovosti vzorca lahko uporabljajo orodja, kot so plošče za elektroforezo, pri čemer iščejo znake razgradnje, ki bi lahko kazale na težavo s celotnim postopkom izolacije RNA.

Raziskovalci lahko izvedejo lastno popolno izolacijo RNA ali to nalogo prenesejo na laboratorijskega asistenta, podiplomskega študenta ali podobnega laboratorijskega delavca. Možno je tudi skleniti izolacijo v drugih laboratorijskih prostorih. To je včasih potrebno za zaščito integritete poskusa z uporabo tretje osebe za ustvarjanje preverljivih in ponovljivih rezultatov. V vseh znanstvenih člankih, ki temeljijo na raziskavah z izolirano RNA, mora raziskovalec razpravljati o metodi, uporabljeni za izolacijo, in o tem, kdo je delo opravil.