Northern blot hibridizacija je tehnika, ki se uporablja za odkrivanje ravni sporočilne RNA (mRNA) v vzorcu in za kvantificiranje količine prisotne mRNA. Čeprav obstajajo druge zmogljivejše tehnike, severni blot ostaja standard zaradi svoje preprostosti in enostavne uporabe. Tehnika Northern blotting omogoča tudi neposredno primerjavo več vzorcev v enem poskusu.
Messenger RNA je vrsta nukleinske kisline, ki nastane, ko se gen izraža. Gen, ki je vklopljen in deluje znotraj celice, se prepiše v mRNA. mRNA se nato transportira v citoplazmo celice, kjer se prevede v protein. Northern blot analiza vzorca celične mRNA lahko zato zagotovi koristne informacije o nizu beljakovin, ki jih celica proizvaja.
Pri Northern blotu se mRNA ekstrahira iz celic in teče skozi elektroforezo denaturiranega agaroznega gela, ki omogoča ločitev mRNA v vzorcu glede na velikost. Vzorci molekul mRNA znanih velikosti se izvajajo istočasno, da se zagotovi kontrola. Ko je elektroforeza končana, se vzorci prenesejo in imobilizirajo na trdni membrani, običajno izdelani iz materiala, kot je najlon. Vzorce nato nekaj ur pred analizo izpostavimo radioaktivno označenim sondam. Med analizo je mogoče mRNA, ki se je hibridizirala v radioaktivno označeno sondo, jasno zaznati z rentgenskim žarkom.
Tehnika Northern blotting omogoča opazovanje vzorcev izražanja genov med različnimi tipi tkiva. Messenger RNA, ekstrahirano iz celic različnih vrst tkiv in organov, je mogoče primerjati in preučiti celične odzive na stres, okužbo in številne druge dražljaje. Z opazovanjem razlik v izražanju mRNA pod različnimi pogoji lahko znanstvenik ugotovi, katere vrste beljakovin celica proizvaja kot odgovor na določene dražljaje. To lahko zagotovi namige o funkcijah neznanih beljakovin ali v primeru znanih beljakovin informacije o celičnih odzivih na zadevne dražljaje.
Na primer, Northern blot lahko pokaže, da se ekspresija neznane beljakovine poveča kot odziv na prisotnost specifičnega toksina. Nato bi lahko sklepali, da je protein vključen v zmanjševanje toksičnosti, morda s transportom kemikalije iz celice ali pretvorbo v metabolit. Če so znani proteini v pregledu, lahko dokumentiranje sprememb v izražanju beljakovin zagotovi informacije o samem odzivu. Če bi na primer povečali ekspresijo znanega molekularnega prenašalca, bi lahko potrdili, da je celični odziv na toksin transport toksina iz celice.