Kaj je konjugat protiteles?

Konjugat protitelesa je označevalna molekula, ki se lahko uporablja v histoloških ali encimskih testih za odkrivanje antigenov za lokalizacijo vezanih protiteles. Deluje tako, da je fizično vezan ali konjugiran na protitelo, ki se uporablja za označevanje antigena, ki nas zanima. Protitelo, ki je označeno s konjugatom protiteles, je orodje, ki se pogosto uporablja v raziskavah za identifikacijo bodisi natančne lokacije bodisi količine beljakovin ali antigenov, ki nas zanimajo, proti katerim so bila protitelesa ali protitelesa ustvarjena.

Histološki in proteomski testi se pogosto zanašajo na protitelesa kot reagent v raziskovalnih tehnikah, s katerimi je mogoče označiti specifične beljakovine. Z izpostavljanjem antigena ali proteina, ki nas zanima, protitelesu, ki je bilo proti njemu ustvarjeno, je mogoče označiti antigene ali proteine. Z uporabo konjugata protitelesa – to je protitelesa, ki je bilo konjugirano z molekulo, ki je posebej uporabljena ali sintetizirana za enostavno odkrivanje – lahko nato identificiramo in analiziramo protitelesa na njihovih ustreznih antigenih. Najpogostejši tip konjugata protiteles je fluorescenčna molekula, ki omogoča identifikacijo antigenov v tkivu pod fluorescentnim mikroskopom. Drugi konjugati vključujejo molekule, kot je peroksidaza iz hrena, ki se uporablja v konjugaciji s protitelesi za kasnejši razvoj z diaminobenzidinom (DAB).

Pogosto se primarna protitelesa dvignejo proti specifičnim antigenom, medtem ko se sekundarna protitelesa konjugirajo na označevalne molekule in dvignejo proti primarnemu protitelesu. Kot primer bi lahko nekoga zanimalo identificiranje antigena, imenovanega Antigen X. Nato bi uporabili na primer protitelo, vzgojeno v miši, ki reagira in se drži antigena X. Da bi lahko ugotovili, kje so ta primarna mišja protitelesa našla in vezano na te molekule antigena X, bi nato uporabili sekundarno protitelo – na primer tisto, vzgojeno pri kozi –, ki bi bilo označeno s konjugatom, zaradi katerega je to sekundarno protitelo mogoče zaznati v encimskih ali fluorescentnih mikroskopskih testih. Za teste pri lokalizaciji antigenov z uporabo elektronskega mikroskopa se zlati delci pogosto uporabljajo kot konjugat protiteles, ker jih je mogoče zaznati z elektronskim žarkom.

Razlog za uporabo primarnih in sekundarnih protiteles namesto konjugacije protiteles, v kateri je primarno protitelo neposredno konjugirano, je stroškovna učinkovitost. Konjugacija protiteles je draga glede časa in reagentov. Zlasti za neobičajne antigene konjugacija protiteles na primarnih protitelesih ni vredna stroškov proizvodnje. Namesto tega lahko z uporabo konjugacije protiteles na sekundarnih protitelesih naenkrat sintetiziramo velike količine konjugiranega protitelesa in jih uporabimo v testih z vrsto primarnih protiteles, prilagojenih za lokalizacijo številnih različnih antigenov, zaradi česar je proizvodni proces vreden in stroškovno učinkovit.

V nekaterih primerih pa bo primarno protitelo označeno, da se zmanjša šum v detekcijskem signalu zaradi povečane vezave nespecifičnih protiteles, ki je posledica uporabe več protiteles. Čeprav bodo ti dragi, zelo občutljivi testi še vedno zahtevali to metodo. Možno je kupiti komplete, ki raziskovalcu omogočajo označevanje konjugatov z lastnim protitelesom po izbiri, s čimer se povečajo stroški reagenta, vendar se zmanjšajo koraki protokola in po možnosti poveča razmerje med signalom in šumom v končnem testu za odkrivanje protiteles.