Izgubljena kolonija, znana tudi kot Roanoke, so bile sanje sira Walterja Raleigha. Marca 1584 je Raleigh prejel donacijo kraljice Elizabete, ki mu je omogočila raziskovanje poganskih regij novega sveta v zameno za eno petino odkritega zaklada. Ta kolonija predstavlja prvi poskus kolonialne naselitve. Raleigh je moral svoje dejavnosti osredotočiti daleč stran od španske prevlade nad ameriško obalo, ki je bila tako daleč na severu kot Florida. Prav tako je moral usmerjati južno od Nove Fundlandije, ki je bila okužena z meglo in sovražnimi Indijanci.
Kapitan Arthur Barlowe in približno sto Angležev, poslanih v Novi svet v imenu sira Walterja Raleigha, so na svetel poletni dan leta 1585 prispeli na bujni in dišeči otok Roanoke, ki so ga krstili kot Virginia. Zaščiteno s vitkimi peščenimi sipinami, ki bi pozneje znana kot Outer Banks, je izgubljena kolonija ponudila obljubo in upanje za nove začetke. Usoda prvega belega otroka, rojenega v novem svetu, Virginie Dare, kot tudi vseh ostalih prebivalcev kolonije, ostaja skrivnost do danes.
Domači prebivalci izgubljene kolonije so bili prijazni in ustrežljivi zgodnjim naseljencem, med njimi briljantni znanstvenik Thomas Hariot, ki je postavil prvi znanstveni laboratorij v Novem svetu, in umetnik po imenu John White. Stvari so šle dobro, dokler Sir Ralph Lane, poveljnik kolonije, ni razjezil Indijance s svojo ostro politiko. Poleti 1586 je sir Francis Drake prispel v Roanoke na poti v Anglijo iz Zahodne Indije. Hrane in zalog je bilo malo, ker ladje iz matične države niso prispele, in vseh razen petnajstih kolonistov se je odločilo, da se vrne z Drakeom.
Oskrbovalne ladje, ki jim je poveljeval sir Richard Grenville, so prispele v izgubljeno kolonijo kmalu po Drakeovem odhodu z otoka, vendar so našli le zapuščeno naselje, kjer ni bilo nikogar sledu. Naslednje leto, avgusta 1587, je Raleigh poslal Johna Whitea s 115 moškimi, ženskami in otroki v drugem poskusu, da bi naselil kolonijo otoka Roanoke. Kolonisti so obnovili zoglenele ostanke nekdanjega naselja in John White je postal novi guverner. Njegova družina, vključno z novorojenim vnukom Virginio Dare, je čakala na njegovo vrnitev iz Anglije z več zalogami, vendar je bil zaradi vojne med Anglijo in Španijo odložen.
Avgusta 1590 se je John White vrnil v Roanoke, a tam ni bilo ničesar. Edini namig je bila skrivnostna beseda “Hrvat”, vklesana na drevesu, ki bi se lahko nanašala na pleme prijaznih Indijancev, ki je živelo južno od izgubljene kolonije. Nekateri pravijo, da so Indijanci pobili naseljence, drugi pa trdijo, da so se preselili dlje v notranjost in se sčasoma poročili z indijanskimi plemeni. Še vedno tretja teorija trdi, da so španske čete s Floride ubile koloniste.