Kaj je analiza celičnega cikla?

Analiza celičnega cikla je tehnika, ki se uporablja v biokemičnih raziskavah za identifikacijo in analizo faze biološke celice. V svoji življenjski dobi celica preide skozi vrsto cikličnih faz, ki jih skupaj imenujemo celični cikel. Količina deoksiribonukleinske kisline (DNK) v celici se spreminja glede na fazo. Pri analizi celičnega cikla je DNK celice obarvana s fluorescentnim barvilom, kar raziskovalcem omogoča, da ugotovijo, koliko DNK je prisotno in kje je celica v svojem ciklu.

Celični cikel je sestavljen iz dveh širokih faz: interfaze in mitoze. Interfaza je sestavljena iz priprave na delitev celice ali mitoze, ki ji pravimo tudi M faza. Večino življenjskega cikla celice porabijo za pripravo na mitozo, ki je za primerjavo kratka, zato je interfaza razdeljena na tri dele: faza G1, faza S in faza G2.

V G1 se celica ukvarja predvsem z rastjo. Med fazo S se genetske informacije celice v obliki DNK replicirajo v pripravo na njeno delitev na dve hčerinski celici. V G2 se celica pripravi na delitev, kar vodi v fazo M. Po mitozi se celica vrne v odsek G1 interfaze in cikel se začne znova. Celice, ki se iz nekega razloga prenehajo deliti, zapustijo cikel in obstajajo inertno v tako imenovani fazi G0.

Celica replicira svojo DNK med fazo S, zato je v celici med G2 in M ​​dvakrat več DNK kot v G1 ali G0. Raziskovalci te informacije uporabljajo pri analizi celičnega cikla, da določijo celično fazo. Analiza celičnega cikla lahko razkrije tudi nepravilnosti v celični DNK.

Tehnika, ki se uporablja pri analizi celičnega cikla, je znana kot pretočna citometrija. Najprej se v celico vnese fluorescenčno barvilo, ki obarva molekule DNK s kemično vezavo nanje. Raziskovalci nato uporabijo instrument, imenovan citometer, da določijo intenzivnost fluorescence celice. Višja fluorescenca kaže, da se je lahko vezalo več barvila, in kaže, da je v celici več DNK.

Običajno se analiza celičnega cikla uporablja za združevanje celic. Iz podatkov se ustvari vrsta grafikona, imenovanega histogram, ki pogosto prikazuje dva različna vrha: enega, ki prikazuje populacijo celic v fazi G1, in drugega – dvakrat višjega -, ki prikazuje tiste v fazi G2. Vrh faze G2 je dvakrat višji, ker celice v tej populaciji vsebujejo dvakrat večjo količino DNK kot tiste v vrhu G1. Celice, ki so v fazi S, ki so še v procesu replikacije DNK, se na grafu prikažejo na vmesni ravni med obema vrhovoma.